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克隆形成率
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 10826 次瀏覽 | 分享到:


實驗簡介
        細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。




服務流程 
        1 取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在完全培養基中備用;
        2 將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每孔50100200個細胞的梯度密度分別接種含2mL 37℃預溫培養液的六孔板中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置375% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養23周;
        3 經常觀察,當培養板中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞1mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應用染色液染1030分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥;
        4 將平皿倒置白色紙片上,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最后計算克隆形成率。
克隆形成率 =(克隆數/接種細胞數)×100% 


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        實驗細胞和細胞處理方案

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        實驗結果與實驗方法報告單。


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