KDHPTM CRISPR/CasRx Vector Kit

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自主產品

自主產品?

KDHPTM CRISPR/CasRx Vector Kit

來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2020-11-10 | 653 次瀏覽 | 分享到:

產品簡介

CRISPR/Cas13是繼CRISPR/Cas9之后新發現的一類核酸酶系統，與Cas9靶向DNA不同，Cas13可以特異靶向RNA，實現對RNA的敲低、定點編輯、剪切調控和檢測清除等。現已發現LwaCas13a、PspCas13b、PguCas13b、RanCas13b、EsCas13d、AdmCas13d、CasRx（RfxCas13d）等多個Cas13核酸酶，都可以靶向切割RNA，其中CasRx（RfxCas13d）具有最高的特異性和切割效率，也是目前發現最小的VI型CRISPR效應蛋白，能更容易利用AAV載體實現體內遞送。

圖1 CRISPR/CasRx系統敲低RNA示意圖

CasRx靶向切割RNA時，靶標RNA的兩端無需PFS，因此gRNA的設計更靈活，基本可靶向RNA的任意位置。與shRNA/CRISPRi等基因沉默技術相比，CRISPR/CasRx顯示有更高的靶向特異性和敲低效率，以及最低的脫靶效應，表明其作為基因敲低工具的獨特優勢。

CasRx與核定位信號NLS融合表達時主要定位于細胞核，能更高效敲低mRNA及在細胞核內的其他RNA。

圖2 CasRx (HA)的亞細胞定位（Konermann et al., 2018）

將gRNA設計為靶向環形RNA（circRNA）的反向剪切位點（back-splicing junction, BSJ）處時，CasRx能高效區分circRNA和其親本基因mRNA，特異靶向敲低circRNA，而不影響mRNA。相比于siRNA/shRNA敲低circRNA時容易出現的效率低、脫靶或錯誤靶向mRNA，使用CRISPR/CasRx系統敲低circRNA是一個強有力的選擇和補充工具。

圖3 gRNA設計位置與circRNA/mRNA豐度（Li et al., 2020）。gRNA設計靶

向BSJ時，circRNA（紅色）的豐度最低，而mRNA（藍色）的豐度基本不變。

KDHP^TM CRISPR/CasRx載體試劑盒提供多種整合型載體，將CasRx和crRNA在同一個載體中表達，只需要設計合成gRNA序列并連接插入即可，載體構建和轉染方便。試劑盒包含整合型通用NC載體，以及構建目標載體的配套試劑，無需酶切，通過一步反應即可快速構建CasRx/gRNA載體。

表1 四種載體區別及對應試劑盒貨號

貨號	載體名稱	載體骨架	U6-gRNA	CMV-CasRx	NLS	GFP
C0101-RL	pCasRx-L1	慢病毒載體	有，NC	有	無	有
C0101-RNL	pCasRxN-L1	慢病毒載體	有，NC	有	有	有
C0101-RA	pCasRx-A1	AAV載體	有，NC	有	無	無
C0101-RNA	pCasRxN-A1	AAV載體	有，NC	有	有	無

注：整合型載體為通用NC載體，含有non-targeting gRNA: TCACCAGAAGCGTACCATACTC。

產品特點

簡便：單一整合型載體同時表達CasRx和crRNA，僅需合成gRNA雙鏈，一步反應即可構建。

快速：30分鐘即可完成載體連接。

高效：連接克隆陽性率達95%以上。

運輸與保存

4℃運輸，-20℃保存，保質期一年，避免反復凍融。

產品組分

貨號	規格	試劑組分
C0101-RL	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRx-L1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRx-L1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RNL	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRxN-L1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRxN-L1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RA	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRx-A1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRx-A1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg
C0101-RNA	20 rxns	Linearized CasRx Vector, From pCasRxN-A1* DNA Ligase Mix 10X Ligase Buffer Nuclease-free Water U6 Primer (10 μM) gRNA-NC Vector, pCasRxN-A1**	40 μL 10 μL 20 μL 200 μL 100 μL 2 μg

*: Linearized CasRx Vector為對應載體去除non-targeting gRNA序列的開環載體，末端保留連接定位序列。

**: gRNA-NC Vector為含有non-targeting gRNA的通用NC載體，與Linearized CasRx Vector為同一骨架。

實驗流程

圖4 CRISPR/CasRx Knockdown Cloning Kit實驗流程圖

說明書下載
吉賽生物KDHPTM CRISPRCasRx Vector Kit說明書Cat.No. C0101

附件：
seq-pCasRx-A1-pCasRxN-A1
seq-pCasRx-L1-pCasRxN-L1

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